высокополимерная дрожжевая рнк что это
РНК из пекарских дрожжей: выделение, фракционирование, биологическая активность Ямковая Татьяна Витальевна
Ямковая Татьяна Витальевна. РНК из пекарских дрожжей: выделение, фракционирование, биологическая активность : выделение, фракционирование, биологическая активность : диссертация. канд. биол. наук : 03.00.23 Новосибирск, 2007 127 с. РГБ ОД, 61:07-3/1061
Содержание к диссертации
ГлаваІ. ОБЗОР ЛИ ГЕРАТУРЫ 10
1.1. Структура и функции дрожжевой РНК 10
1.2. Выделение РНК из пекарских дрожжей 13
1.3. Гидролиз дрожжевой РНК 21
1.4. Использование мономеров дрожжевой РНК для синтеза лекарственных препаратов 23
1.5. Биологическая активность дрожжевой РНК 28
1.5.1. Иммуномодуляция 28
1.5.2. Стимуляция метаболизма 29
1.5.3. Детоксикация 30
1.5.5. Токсичность 31
1.6. Клиническое применение дрожжевой РНК 32
1.7. Биологическая активность и клиническое применение высокополимерной дрожжевой РНК 33
2.1. Экспериментальные животные 36
2.3. Аналитические методы 37
2.4. Препаративные методы 40
2.4.1. Выделение суммарной РНК из пекарских дрожжей 40
2.4.2. Выделение высокополимерной РНК из пекарских дрожжей(йариант 1) 41
2.4.3. Выделение высоко- и низкополимерной РНК из
пекарских дрожжей (вариант 2) 43
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 48
3.1. Выделение суммарной РНК из пекарских дрожжей 48
3.2. Выделение фракций РНК различной степени полимерности из пекарских дрожжей 60
3.3. Иммобилизация и некоторые свойства иммобилизованных ферментов нуклеинового обмена из ядов змей 77
3.4. Биологическая активность РНК из пекарских дрожжей. 84
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 107
Биологические испытания показали, что он является иммуномодулятором и адъювантом (Ред. Масычева В.И. Сб. науч.трудов сотр. НИКТИ БАВ, 1996). Завершены доклинические и 1 фаза клинических испытаний Полирибоната в качестве адъювантного средства. Проведены также его клинические испытания на больных хронической лейкопенией (Масычева В.И. и др., 1997). Полученные результаты свидетельствуют о выраженном иммуномодулирующем и лейкостимулирующем эффекте.
Несмотря на большой интерес к дрожжевой РНК, описанные в литературе способы выделения ее высокополимерной фракции недостаточно эффективны и требуют совершенствования. Классический способ выделения РНК фенольной экстракцией (Holley R.W., 1963; Филиппович Ю.Б. и др., 1982) в препаративных масштабах неприменим из-за проблем с утилизацией отходов Экстракция додецилсульфатом натрия (ДДС-Na) в условиях, предложенных Крестфилдом и соавт. (Crestfield A.M. et al, 1955), приводит к получению препаратов, разрушающихся при продолжительном хранении, вероятно, из-за неполной инактивации рибонуклеаз. Добавки ингибиторов рибонуклеаз не решают проблему и удорожают процесс.
Изучить влияние на процесс лизиса клеток дрожжей различных ПАВ, концентрации наиболее эффективного ПАВ, температуры, времени и присутствия ингибитора рибонуклеаз (ЭДТА). Оптимизировать условия лизиса.
Разработать новые способы выделения суммарной РНК из пекарских дрожжей и получения ее фракций различной степени полимерности, в том числе высокополимерной. Исследовать возможность замены высокоскоростного центрифугирования на простое отстаивание.
Разработать экономичный способ получения нуклеозидов и 5′-мононуклеотидов путем гидролиза некондиционных партий и отходов производства дрожжевой РНК иммобилизованными ферментами нуклеинового обмена из ядов змей.
Провести оценку биологической активности суммарной и высокополимерной дрожжевой РНК в экспериментах in vivo.
Научная новизна полученных результатов.
Детально изучены условия лизиса клеток дрожжей и оптимизированы методы извлечения РНК из лизата. На основе этих исследований предложены три новых способа выделения высокополимерной РНК из дрожжей. Лизис биомассы проводили разработанным нами методом: 2,5%-ным раствором ДДС-Na при 100С в течение > 40 мин.
Впервые при выделении высокополимерной РНК вместо центрифугирования в качестве основного приема фракционирования лизатов предложено использовать отстаивание, которое можно проводить как на холоду (0-4С), так и при комнатной температуре. Скорость отстаивания можно регулировать изменением состава дисперсионной среды.
Впервые для высаливания высокополимерной РНК из осветленного лизата был применен З М NaCl. Из оставшейся фракции выделена низкополимерная РНК осаждением соляной кислотой.
Разработан принципиально новый метод дробного осаждения РНК этанолом, с помощью которого из суммарной РНК выделена высокополимерная и тРНК-подобная фракции.
Физико-химические свойства высокополимерной РНК превосходят таковые, получаемые по традиционным процедурам, особенно это касается близкого к нулевому прироста КРФ.
Фосфодиэстеразы из ядов кобры и гюрзы иммобилизованы на CNBr-активированной сефарозе 4В с выходом 80-90%. Показана возможность
длительной эксплуатации колонок с иммобилизованными ферментами (по крайней мере, в течение двух месяцев).
Исследована биологическая активность трех препаратов РНК из пекарских дрожжей: суммарной РНК и высокополимерной РНК с разными распределениями по молекулярным массам. Впервые показано, что препараты РНК различной степени полимерности и чистоты действуют на разные органы и ткани крыс, стимулируя избирательно в них биосинтез белка.
Научно-практическое значение работы. Проведенные исследования позволяют значительно упростить технологию выделения и фракционирования дрожжевой РНК. Особенно это касается нового метода дробного осаждения РНК этанолом и нового способа выделения двух фракций РНК: высоко- и низкополимерной путем простого отстаивания. Замена центрифугирования на быстрое отстаивание при комнатной температуре позволяет не только упростить технологический процесс, но и снизить затраты на электроэнергию и оборудование.
Обнаруженное в работе избирательное воздействие препаратов дрожжевой РНК различной степени полимерности и чистоты на разные органы и ткани лабораторных животных после дальнейшего исследования может послужить основой для создания новых лекарственных средств.
Основные положения, выносимые на защиту:
Эффективный лизис клеток пекарских дрожжей достигается при обработке 2.5%-ным раствором ДДС-Na при 100С в течение > 40 мин.
Выделение высокополимерной РНК из лизата пекарских дрожжей может быть осуществлено в течение РНК из пекарских дрожжей: выделение, фракционирование, биологическая активность
Виталанг-2
ИНСТРУКЦИЯ
по ветеринарному применению лекарственного препарата Виталанг-2
(Организация-разработчик: ООО «Виталанг», 630055, Россия, Новосибирская обл., г. Новосибирск, ул. Рубиновая 4-128)
Общие сведения
Лекарственный препарат Виталанг-2 выпускают расфасованным по 25 мг в стеклянные флаконы вместимостью 3 или 10 мл, укупоренные резиновыми пробками, укрепленными алюминиевыми колпачками.
Флаконы с лекарственным препаратом в количестве 10 штук упаковываются в пачку (коробку). Каждую потребительскую упаковку лекарственного препарата снабжают инструкцией по его применению.
Лекарственный препарат хранят в закрытой упаковке производителя в защищенном от света месте, отдельно от продуктов питания и кормов, при температуре не выше 25 °С.
Лекарственный препарат следует хранить в местах, недоступных для детей.
Неиспользованный лекарственный препарат утилизируют в соответствии с требованиями законодательства.
Условия отпуска: без рецепта ветеринарного врача.
Фармакологические (биологические) свойства
Фармакотерапевтическая группа лекарственного препарата для ветеринарного применения: иммуномодуляторы.
Лекарственный препарат Виталанг-2 является амфифильным комплексом одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae (промышленные штаммы), содержащей короткие двуспиральные участки с олеиновой кислотой. Олеиновая кислота является эффективным транспортером РНК через биологические мембраны. Проникающие с помощью олеиновой кислоты внутрь животных клеток молекулы РНК воспринимаются как вирусоподобные частицы. В ответ в организме животного индуцируется биосинтез интерферона у. Кроме того, лекарственный препарат Виталанг-2 дозозависимо увеличивает массу лимфоидных органов (тимуса и селезенки), также возрастает среднее количество клеток в данных органах. Лекарственный препарат индуцирует лейкоцитарную реакцию, дозозависимо стимулирует первичный (IgM) и вторичный (IgG) гуморальный иммунный ответ. Как следствие, повышается неспецифическая резистентность организма животного, в том числе и птицы в отношении возбудителей инфекционных болезней.
По степени воздействия на организм лекарственный препарат Виталанг-2 относится к малоопасным веществам (4 класс ГОСТ 12.1.007-76), в рекомендуемых дозах не оказывает местно-раздражающего и сенсибилизирующего действия.
Порядок применения
Лекарственный препарат Виталанг-2 применяют при лечении инфекционных болезней животных, в том числе птицы.
Противопоказаний к применению лекарственного препарата Виталанг-2 не установлено.
При работе с лекарственным препаратом следует соблюдать общие правила личной гигиены и техники безопасности, предусмотренные при работе с лекарственными средствами для ветеринарного применения. Пустую упаковку из-под лекарственного препарата запрещается использовать для бытовых целей, она подлежит утилизации с бытовыми отходами. При случайном контакте лекарственного препарата с кожей или слизистыми оболочками глаз, их необходимо промыть большим количеством воды. Людям с гиперчувствительностью к компонентам препарата следует избегать прямого контакта с ним. В случае появления аллергических реакций или при случайном попадании компонентов препарата в организм человека следует немедленно обратиться в медицинское учреждение (при себе иметь инструкцию по применению или этикетку).
Разрешается применение лекарственного препарата молодняку животных, в том числе птицы, беременным животным, животным в период лактации, а также птице в период яйценоскости.
Побочных действий, нежелательных реакций при применении лекарственного препарата в соответствии с настоящей инструкцией, как правило, не наблюдается.
Симптомов патологических состояний и отклонений от физиологической нормы при передозировке лекарственным препаратом не установлено.
Применение лекарственного препарата Виталанг-2 не исключает применения других лекарственных средств.
Особенностей действия лекарственного препарата для ветеринарного применения при первом приеме или при его отмене не установлено.
Следует избегать нарушений доз и курса применения лекарственного препарата, так как это может привести к снижению его эффективности. В случае пропуска очередного применения лекарственного препарата его следует применить как можно скорее в той же дозе по той же схеме.
Продукты животноводства после применения лекарственного препарата Виталанг-2 разрешается использовать в пищевых целях без ограничений.