что нужно для пцр лаборатории

Требования к организации помещений для лаборатории ПЦР

Проведение исследований методом ПЦР допускается на базе действующих лабораторий при условии организации в лаборатории самостоятельных или выделенных в составе других функциональных помещений рабочих зон, соответствующих этапам ПЦР-анализа.

ПЦР-лаборатория должна включать следующий минимальный набор рабочих зон:

Важно отметить, что в случае применения метода ПЦР в режиме «реального времени» (real-time PCR) нет необходимости в детекции продуктов амплификации методом электрофореза. Следовательно, рабочую зону в помещении лаборатории для электрофореза можно не выделять.

В ПЦР-лабораториях необходимо также предусмотреть наличие вспомогательных помещений: архив (для учетных документов), комнату для персонала, кабинет заведующего, раздевалки для сотрудников, комнаты приема пищи, санитарных комнат (туалет), подсобных помещений (склад).

В идеальном варианте необходимо иметь автоклавную комнату для обеззараживающего исследуемого материала. Она может быть общей с другими подразделениями учреждения при условии соблюдения требований биологической безопасности.

Помещения для выполнения работ на этапах ПЦР-анализа должны быть боксированными (боксы с предбоксами). В зоне приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала проводят прием материала, пробоподготовку (сортировку, маркировку, центрифугирование и прочее), хранение и первичную инактивацию остатков биоматериала дезинфицирующими средствами. Зону приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала располагают в комнате приема материала или в отдельном боксированном помещении. Здесь же можно проводить прием и обработку проб для исследования другими методами (иммунология, например), при условии выделения отдельного оборудованного рабочего места для ПЦР-анализа.

Зону выделения ДНК/РНК размещают в отдельном помещении. При организации ПЦР-лаборатории на базе действующей лаборатории допускается выделение ДНК/РНК в помещениях, в которых проводят другие виды исследований, кроме генно-инженерных работ. В этом случае в помещении организуют рабочую зону для выделения ДНК/РНК, в которой располагают ПЦР-бокс или бокс биологической безопасности. В ПЦР-боксе для выделения ДНК/РНК не допускается проведение других видов работ!

В зоне приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР производят приготовление ПЦР-смеси, внесение в пробирку для ПЦР выделенных препаратов ДНК/РНК или кДНК, обратную транскрипцию РНК и амплификацию ДНК или кДНК. Помещение для приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР должно быть отдельным. Приготовление реакционных ПЦР-смесей проводят в ПЦР-боксе.

Зону детекции продуктов амплификации располагают в отдельном помещении, по возможности оснащенном ПЦР-боксом. При необходимости одновременного использования для детекции продуктов амплификации метода электрофореза и метода гибридизационного анализа следует выделить в помещении детекции отдельную рабочую зону для проведения гибридизационного анализа. В этом случае оборудование и принадлежности для каждого вида детекции маркируют применительно к каждой зоне. Не допускается использовать для проведения гибридизационного анализа пипетки и посуду, предназначенные для электрофореза.

Планировочные решения и размещение оборудования должны обеспечивать поточность движения исследуемого материала. Следует полностью исключить воздухообмен между помещением детекции продуктов амплификации и другими помещениями.

ПЦР-лабораторию оборудуют водопроводом, канализацией, электричеством и отоплением. Все помещения ПЦР-лаборатории обеспечивают достаточным естественным и искусственным освещением.

При строительстве новых или реконструкции имеющихся ПЦР-лабораторий помещения оборудуют приточно-вытяжной или вытяжной вентиляцией. Разница в давлении воздуха в помещениях ПЦР-лаборатории достигается за счет различий в кратности воздухообмена в них. Кратность воздухообмена должна соответствовать значениям, приведенным в таблице:

При необходимости в ПЦР-лаборатории могут быть установлены кондиционеры.

Внутреннюю отделку помещений выполняют в соответствии с их функциональным назначением. Поверхности стен, пола и потолка в лабораторных помещениях должны быть гладкими, без щелей, легко обрабатываемыми, устойчивыми к действию моющих и дезинфицирующих средств. Полы не должны быть скользкими. Лабораторная мебель должна иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь трещин и швов. Помещения лаборатории должны быть непроницаемы для грызунов и насекомых. ПЦР-лабораторию обеспечивают средствами пожаротушения.

Помещения на всех этапах ПЦР-анализа оборудуют бактерицидными лампами в соответствии с «Методическими указаниями по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхности в помещениях». Бактерицидные лампы в помещениях ПЦР-лаборатории устанавливают из расчета 2,5 Вт/куб.м.

Источник

Организация ПЦР-лаборатории

Специфика ПЦР-лабораторий

Компания Лабораторная Диагностика специализируется на комплексном оснащении ПЦР-лабораторий в России с 1997 года. Мы обладаем уникальным многолетним опытом создания лабораторий ПЦР «под ключ». Наши специалисты готовы ответить на любые ваши вопросы по ПЦР-диагностике, оборудованию, реагентам, расходным материалам, требованиям и нормам организации современных ПЦР лабораторий.

Организация ПЦР-лаборатории требует тщательной подготовительной работы. Необходимо заранее определить, какие именно задачи предстоит решать в лаборатории. Помимо этого важно понимать, какими методами будут достигнуты поставленные задачи.

Области использования различных методов ПЦР

В основу функционирования ПЦР-лаборатории могут быть заложены три основных метода:

Мультиканальный флуориметр ALA-1/4 (BioSan)

Стоит заметить, что в ПЦР-лаборатории, при соответствующем оснащении, можно использовать и другие методы:

Выбор метода повлияет на общую стоимость проекта оснащения лаборатории. Помимо типа ПЦР-лаборатории, не менее важно определить приблизительный пробопоток вашей будущей лаборатории. Какое количество анализов/тестов/реакций вы планируете выполнять в день/неделю/месяц в лаборатории? Исходя из ожидаемого количества, можно заранее определить количество сотрудников/операторов, которые будут проводить реакции в лаборатории.

Параллельно с выбором оборудования следует совершить не менее важный шаг – осмотреть помещение, где планируется организовать лабораторию. Подробную информацию вы можете найти в разделе «Требования к организации помещений для лаборатории ПЦР». Здесь же сообщим некоторые принципиальные моменты:

Частные методические и организационные вопросы

В данном разделе обсуждаем принципиальный вопрос: как вы будете выделять нуклеиновые кислоты из образцов? Варианта два – ручным методом с помощью готовых наборов, либо с помощью автоматических экстракторов.

Ручной метод дешевле. В этом главное преимущество. Недостатков несколько: более длительная процедура, меньшее количество образцов можно выделить за день, колебания в качестве и количестве выделяемой ДНК/РНК, зависимость от оператора. Автомат позволяет высвободить рабочие руки оператора для другой работы, стандартизирует качество и количество выделения НК, сокращает время выделения, увеличивает количество выделяемых образцов за рабочий день/смену. Главный недостаток: более высокая стоимость выделения одного образца.

Как правило, на начальном этапе существования лаборатории выделяют ручным методом. При увеличении пробопотока в ПЦР-лаборатории начинают использовать экстрактор нуклеиновых кислот.

Многие ПЦР-лаборатории имеют дело с образцами, которые необходимо проанализировать на наличие ДНК/РНК возбудителя инфекционных заболеваний. Существуют разные требования безопасности при работе с патогенами III-IV группы и с микроорганизмами I-II групп патогенности. Для подробного знакомства с данным вопросом рекомендуется изучить раздел «Нормативно-правовые документы».

Все отходы, возникающие в процессе ПЦР, подвергаются обязательному химическому (гиппохлорид) и термическому (стерилизация) обеззараживанию.

Источник

Классическая ПЦР-лаборатория

Ниже представлен список обрудования с рекомендуемыми моделями для оснащения лаборатории, использующей метод полимеразной цепной реакции с детекцией результатов при помощи гель-электрофореза.

За более подробной информацией обращайтесь к специалистам компании ЗАО «Лабораторная диагностика».

Бокс абактериальной воздушной среды БАВп-01-«Ламинар-с»-1,5

Процессор магнитных частиц KINGFISHER FLEX с комплектом расходных реагентов

Персональный вортекс BioSan V-1 plus для всех типов пробирок

Аспиратор с сосудом-ловушкой BioSan FTA-1

Система очистки лабораторной воды Millipore Simplisity UV

Холодильник с морозильной камерой

Вертикальный низкотемпературный морозильник Sanyo MDF-U3286S

Штативы для пробирок 0.2, 0.5 и 1.5 мл

Комплект дозаторов переменного объема Hamilton SoftGrip

Бокс для стерильных работ BioSan UVT-S-AR

Персональный вортекс BioSan V-1 plus для всех типов пробирок

Холодильник с морозильной камерой

Штативы для пробирок 0.2, 0.5 и 1.5 мл

Комплект дозаторов переменного объема Hamilton SoftGrip

Прибор для электрофореза Biometra Compact M

Источник

Сколько стоит сдать ПЦР-анализ

Я пять лет работал в государственной медицинской лаборатории.

По опыту знаю, что пациентам бывает непросто разобраться с тем, какие тесты им нужно сдавать, да и нужно ли вообще. В этой статье расскажу, что такое ПЦР-анализы и можно ли на них сэкономить.

Сходите к врачу

Наши статьи написаны с любовью к доказательной медицине. Мы ссылаемся на авторитетные источники и ходим за комментариями к докторам с хорошей репутацией. Но помните: ответственность за ваше здоровье лежит на вас и на лечащем враче. Мы не выписываем рецептов, мы даем рекомендации. Полагаться на нашу точку зрения или нет — решать вам.

Что такое ПЦР-тесты и зачем их сдавать

В отличие от криминалистов, врачей обычно интересуют две вещи:

Но генетические анализы нужны не так уж часто, поэтому в статье мы будем говорить про ПЦР-анализы на инфекции.

Как работает ПЦР-анализ. У большинства живых существ на нашей планете, за исключением некоторых вирусов с РНК-геномами, генетический материал представляет собой длинную двухцепочечную молекулу ДНК.

Цепочка ДНК состоит из «звеньев» — нуклеотидов. Это четыре небольшие молекулы, строение которых универсально для всех живых существ. Из одного и того же набора нуклеотидов можно собрать геном вируса оспы, человека или синего кита. Вся разница — в порядке, в котором нуклеотиды идут в цепочке ДНК. Зная уникальный порядок нуклеотидов для участка ДНК какой-нибудь болезнетворной бактерии, мы можем засечь его присутствие в биологическом материале. А поскольку этот порядок уникален, мы не перепутаем его с человеческой ДНК.

Во время полимеразной цепной реакции кусочек чужеродного генетического материала из образца при помощи особого белка-фермента размножают много-много раз. В результате получается столько ДНК, что ее хватает для успешной идентификации.

Для каждого микроорганизма набор реактивов нужен свой. Поэтому врачи назначают не ПЦР-анализ вообще, а исследование на конкретный микроорганизм. Так что ПЦР-тест на гепатит С не поможет найти в образце еще и хламидии.

ПЦР-анализы бывают качественные и количественные. Качественные позволяют понять, есть ли в образце генетический материал бактерии или вируса, который мы ищем. А количественные — сколько именно там этого материала. Если сделать несколько таких тестов во время лечения, станет ясно, действует ли на микробов назначенное лекарство.

Как подготовиться к ПЦР-анализу

Чтобы выяснить, какая инфекция поразила человека, у него обычно берут кровь, мочу, образцы клеток слизистой из ротоглотки или с шейки матки.

В России кровь по умолчанию рекомендуется сдавать натощак, не менее чем с интервалом в 8—12 часов после приема пищи. Однако за рубежом таких строгих правил нет: считается, что перед походом в лабораторию можно позавтракать без сладкого и жирного, например кашей без сахара и масла, куриной грудкой или яйцом. Так что если у вас был легкий завтрак, кровь сдавать можно. Пить тоже не запрещено, но лучше ограничиться чистой водой без газа.

Если в качестве материала выступает моча, ее нужно собирать утром, как только проснетесь, в чистый контейнер для анализов или в вымытую с мылом банку из-под детского питания.

Правила, по которым нужно сдавать мазок на ПЦР из половых органов, отличаются для мужчин и для женщин. Всем за 1—2 дня до исследования нужно отказаться от секса, а в течение 1,5—2 часов перед исследованием — воздерживаться от мочеиспускания. Женщинам за сутки до процедуры не следует проводить спринцевание, пользоваться свечами и антисептиками для подмывания. Во время менструации сдавать биологический материал нельзя.

Можно ли верить ПЦР-тесту

Ни один лабораторный тест не обеспечивает абсолютной точности, всегда есть вероятность ошибки. Причем ошибиться тест может в обе стороны: либо не найти искомую инфекцию у пациента, которой он на самом деле заражен, либо обнаружить ее у человека, болеющего чем-то другим или вовсе здорового.

При этом ПЦР-анализы зачастую точнее других методов поиска возбудителя инфекционных заболеваний. Например, возбудителей гонореи у женщин можно искать под микроскопом, можно выращивать в чашке Петри, а можно определять методом ПЦР. В первом случае чувствительность анализа в пределах 36,2%, во втором — 89,7%, а в третьем — 89,9—100%. Получается, что ПЦР-анализ — самый надежный, и доверять ему можно. Примерно так же дела обстоят и с другими половыми инфекциями.

Информативность ПЦР в диагностике инфекций, передаваемых половым путемPDF, 152 КБ

Однако есть и относительно новые, менее надежные варианты ПЦР-тестов — например, на коронавирусную инфекцию. По словам Дениса Проценко, главного врача инфекционной больницы в Коммунарке, чувствительность тестов для выявления COVID-19 — 70—80%. Согласно китайским данным, чувствительность теста может быть еще ниже — в пределах 66—80%.

Но здесь многое зависит от времени взятия образца. Если мазок из горла взяли через 3—4 дня после появления симптомов, то вирус уже мог успеть спуститься из ротоглотки в легкие, и тогда вероятность найти его в мазке составляет всего 40%.

Хотя ПЦР-тесты на коронавирус работают хуже, чем ПЦР-тесты на половые инфекции, ничего точнее для диагностики коронавирусной болезни у нас пока нет. Врачи назначают повторный тест, если у них по результатам диагностики остаются сомнения.

Источник

• ← во сне горит родительский дом к чему это
• что нужно для ремонта унитаза →

А. ЗОНА ПРИЕМА, РЕГИСТРАЦИИ И ПЕРВИЧНОЙ ОБРАБОТКИ МАТЕРИАЛА
оборудование	название и характеристика	назначение
	Хранение образцов и компонентов полимеразной цепной реакции
	Размещение пробирок с образцами и компонентами ПЦР на всех этапах работы оператора
	Автоматическое дозирование объема жидкости
В. ЗОНА ПРИГОТОВЛЕНИЯ РЕАКЦИОННОЙ СМЕСИ И ПРОВЕДЕНИЯ ПЦР
оборудование	название и характеристика	назначение
	Хранение образцов и компонентов полимеразной цепной реакции
	Размещение пробирок с образцами и компонентами ПЦР на всех этапах работы оператора
	Автоматическое дозирование объема жидкости
Г. ЗОНА ДЕТЕКЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ПЦР
оборудование	название и характеристика	назначение